Kui palju maksab ligeerimise ümberkujundamine?

2024 Autor: Miles Stephen | [email protected]. Viimati modifitseeritud: 2023-12-15 23:35

Muutumine . Lisage 1–5 µl ligeerimine segu pädevatele rakkudele muutumine . Laiendatud ligeerimine PEG-ga põhjustab languse muutumine tõhusus (kiire Ligeerimine Komplekt). Elektroporatsioon on soovitatav suurte konstruktsioonide puhul (>10 000 aluspaari).

Kui palju ligeerimisprodukti on mul vaja transformeerimiseks?

Muutumine . Lisage 1–5 µl ligeerimine segu pädevatele rakkudele muutumine . Laiendatud ligeerimine PEG-ga põhjustab sissetuleku languse muutumine tõhusus (kiire Ligeerimine Komplekt). Elektroporatsioon on soovitatav suurte konstruktsioonide puhul (>10 000 aluspaari).

Seejärel tekib küsimus, mis on ligeerimine ja transformatsioon? Tüüpilises kloonimiskatses sisestavad teadlased kõigepealt DNA tüki, näiteks geeni, DNA ringikujulisse tükki, mida nimetatakse plasmiidiks. Selles etapis kasutatakse restriktsiooniensüüme ja DNA ligaasi ning seda nimetatakse a ligeerimine . Pärast a ligeerimine , on järgmine samm DNA ülekandmine bakteritesse protsessis, mida nimetatakse muutumine.

Seejärel võib küsida, kui palju DNA-d on ligeerimiseks vaja?

Tõhususe tagamiseks peaks vektori + inserti üldine kontsentratsioon olema vahemikus 1–10 Μg/ml ligeerimine . Vektor: soovitatav on sisestada molaarsuhted vahemikus 1:1 kuni 1:10 (tüüpiline on 1:3). Kui te pole kindel oma DNA kontsentratsioonides, tehke mitu ligeerimist erineva vahekorraga.

Kui kaua saate ligeerimisreaktsiooni säilitada?

Ligatsioonid võivad teha toatemperatuuril või jahedamas (arvan, et 12-16°C) üleöö või isegi paar päeva, kui sa olen tõesti hõivatud. Sa saad samuti hoidke ligeerimist külmikusse ja võta see hiljem välja, et jätkata ligeerimist toatemperatuuril as pikk vastavalt vajadusele.