Kuidas arvutatakse DNA kontsentratsioon spektrofotomeetriga?
Kuidas arvutatakse DNA kontsentratsioon spektrofotomeetriga?

Video: Kuidas arvutatakse DNA kontsentratsioon spektrofotomeetriga?

Video: Kuidas arvutatakse DNA kontsentratsioon spektrofotomeetriga?
Video: Грунтовка развод маркетологов? ТОП-10 вопросов о грунтовке. 2024, November
Anonim

DNA kontsentratsioon on hinnanguliselt neeldumise mõõtmine 260 nm juures, A reguleerimine260 hägususe mõõtmine ( mõõdetuna neeldumine 320 nm juures), korrutades kõrval lahjendustegur ja kasutades suhe, mida A260 1,0 = 50 ug/ml puhast dsDNA-d.

Inimesed küsivad ka, kuidas leiate DNA kontsentratsiooni ja puhtuse?

Hindama DNA puhtus , mõõta neeldumist vahemikus 230 nm kuni 320 nm, et tuvastada muid võimalikke saasteaineid. Kõige tavalisem puhtuse arvutamine on neeldumise suhe lainepikkusel 260 nm jagatud näiduga lainepikkusel 280 nm. Hea kvaliteet DNA saab A260/A280 suhe 1,7–2,0.

Samuti, milline on hea DNA kontsentratsioon? A hea kvaliteet DNA proovis peaks olema A260/A280 suhe 1,7-2,0 ja A260/A230 suhe on suurem kui 1,5, kuid kuna erinevate tehnikate tundlikkus nende saasteainete suhtes on erinev, tuleks neid väärtusi võtta ainult proovi puhtuse suunanäitajana.

Kuidas NanoDrop sellega seoses DNA kontsentratsiooni arvutab?

Korrutate neeldumise väärtuse 260 nm juures fikseeritud teguriga (see on 50 DNA ) ja saate DNA kontsentratsioon . Voilá. (Ok, see on tehniliselt 10 mm paksuse proovi A260, mis on korrutatud 50-ga; NanoDrop väljendab A260 nii, nagu oleks proov 10 mm paksune, nagu tavalises küvetis).

Miks pidime oma DNA kvantifitseerimiseks kasutama spektrofotomeetrit?

A spektrofotomeeter on suudab määrata nukleiinhapete keskmisi kontsentratsioone DNA või segus esinev RNA, samuti nende puhtus. Kasutades Beer-Lamberti seadus on võimalik seostada neeldunud valguse hulka neelduva molekuli kontsentratsiooniga.

Soovitan: